Principe de la coloration "PATAg" pour Periodic Acid Thiocarbohydrazide Argent

Il s'agit d'une méthode de visualisation spécifique des polysaccharides à l’échelle ultrastructurale en les contrastant. Elle comporte 3 étapes principales:
La première étape est une oxidation par l’acide périodique des fonctions vic- glycols (vic: vicinales; glycols: alcool primaires portés par les cycles osidiques) qui fait apparaûtre des fonctions aldéhydes.
La seconde étape consiste en un traitement des coupes par le thiocarbohydrazide (TCH) qui se condense sur les fonctions aldéhydes.
Dans la 3ème étape les coupes sont traitées au protéinate d'argent qui donne lieu à la formation de précipités d'argent métallique denses aux électrons.

Protocole:
Appliqué à des coupes ultrafines (80 nm) réalisées dans des tissus préparés selon la méthode standard de double fixation glutaraldéhyde - OsO₄ et enrobage epon. Les coupes sont récupérées sur des grilles d’or recouvertes de formvar. Les grilles sont successivement :

• Déposées à la surface de gouttes (~ 30 µl) d'acide  périodique 1%, pendant 20 minutes à T° ambiante. Des grilles témoin sont déposées à la surface de gouttes  (~ 30 µl) d’ H₂O₂ 5%, pendant 20 minutes à T° ambiante
• Rincées  4 x 5 minutes sur des gouttes successives (~ 50 µl) d'H₂O distillée
• Déposées à la surface de gouttes de 50 µl d’une solution de TCH 0,2%, dans une chambre humide, à l’obscurité, pendant 30 minutes à 72 h,  selon le matériel. Il convient de contrôler régulièrement que les gouttes ne sèchent pas.
• Lavées par passages sur des gouttes d’acide acétique de moins en moins concentré :20 % (4 x 5 min),10% (5 min),5% 5 min, 2% 5 min et 1% 5 min).
• Rincées par passages sur des gouttes d’H₂O milliQ filtrée (Millipore) 5 x 5 min
• Déposées à la surface d’une goutte de protéinate d'argent 1%, pendant 30 min à T° ambiante, à l'obscurité
• Lavées de nouveau par 4 passages sur de l'eau distillée
• Séchées et observées au microscope électronique à transmission.