Réalisation et coloration de coupes semi fines ....un préalable à la réalisation de coupes ultrafines

Il s'avère souvent indispensable de réaliser des coupes dites semi fines de 1 μm d'épaisseur  au couteau de verre ou au couteau de diamant Histo dans des échantillons enrobés dans l'Epon, le Spurr ou le LR White. Il s'agit d'un préalable à la réalisation de coupes ultrafines permettant (1) de juger de la qualité de la préparation de l'échantillon et (2) de sélectionner une zone d'interêt dans ce dernier. Ces coupes sont colorées et photographiées au microscope photonique.
Deux exemples sont présentés ci - dessous, celui de coupes réalisées (1) dans une extrémité de racine primaire de Zea mays et (2) dans la partie apicale d'un nodule indéterminé de Leucaena leucocephela induit par NGR234.

Première illustration : coupes transversale de 1μm et 80 nm dans une extrémité de racine primaire de Zea mays

Ci dessous à gauche coupe transversale de 1μm réalisée au couteau de diamant histo (Diatome) colorée au bleu de méthylène - fuchsine basique. Les parois et les grains d'amidon des amyloplastes sont colorés en rose (voir détail du milieu), le cytoplasme et les noyaux en bleu. Prise de vue : microscope Nikon Eclipse 80i.
Dans cet échantillon on sélectionne ensuite une région de la coupe pour la réalisation de coupes ultrafines de 80 nm.  La taille de cette zone ne doit pas être plus grande que la longueur du couteau ultracut utilisé qui est en général de quelques mm. Les coupes ultrafines ont été colorées au PATAg (voir photo de droite) pour la mise en évidence de l'amidon et observées au microscope électronique à transmission.

Deuxième illustration : coupes réalisées dans la partie apicale de nodule ID de Leucaena leucocephala induit par NGR 234